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材料制作方法
发布时间:2011.03.01 新闻来源:北京皇城股骨头坏死专科医院 浏览次数:

1 材料制作方法

1.1 动物模型制作

1.1.1 股骨头坏死模型制作

取出生后10日内大鼠乳鼠,自肘关节以上剪除前肢,自尾根部剪除尾部,烧灼止血后放回笼中,继续由母鼠喂养。一个月后,平均体重增至150g以上,开始灌服醋酸泼尼松,20mg/kg体重,隔日一次共三个月。

    1.1.2 骨质疏松模型制作:取体重200g±20g的雌性大鼠,手术摘除双侧卵巢,以模拟绝经后雌激素水平极度低下的机体状况。

1.2 观察药物

“承载丸”由黄克勤专家提供,剂型为大蜜丸(吉林市制药厂加工)。批文号:吉市卫药自制92002。

 

1 中国中医研究院骨伤科研究所

2 北京皇城股骨头坏死专科医院

 

1.3组别及给药剂量和方式

“承载丸”治疗股骨头坏死药效学观察,设正常对照组,阴性对照组,“承载丸组”。治疗骨质疏松症的药效学观察加设阿法—D3组,具体方法如下:

1.3.1    正常对照组:骨质疏松正常对照为成年雌性大鼠,股骨头坏死正常对

照为制作模型的同期乳鼠不作任何处理而长至成鼠。

1.3.2    雌性对照组:两部分观察的阴性对照组分别为摘除双侧卵巢后不给任

何药物及乳鼠剪肢一个月后,只灌服醋酸泼尼松不给其它任何药物。

1.3.3    “承载丸组”:在灌服醋酸泼尼松的同时,开始灌服“承载丸”。按大

鼠体表面积计算,使用成人日用量(2丸)的4倍,每日一次,共灌服三个月。骨质疏松药效学观察在摘除双侧卵巢后第三天开始灌服同上剂量的“承载丸”共三个月。

1.3.4    维生素D对照组:使用阿法—D3(以色列梯瓦制药工业有限公司出

品),剂量为0.0042,相当于成人维持量,每日灌服一次,共三个月。

1.4 观察指标及检测方法

1.4.1 全身骨密度:在笨巴比妥钠麻醉下使用骨密度仪(Lunar DPX)测定全身骨密度。

1.4.2 股骨骨密度:在戊巴比妥钠麻醉下,腹主动脉放血处死动物,取一侧股骨仔细剔除软组织,在骨密度仪上测定骨密度。

1.4.3 股骨强度、刚性测定:测定骨密度后的股骨在电子万能试验机(WD-1型,长春市非金属试验机厂出品)上进行骨强度及刚性测定。

1.4.4 股骨湿重、干重、灰重:将测定骨强度、刚性后的股骨置电子天平上称重后,置60℃4小时烘干,称重。再置入马氏炉800℃6小时灰化,称重。

1.4.5 股骨头毛细血管分布观察:将股骨头坏死模型动物的戊巴比妥钠麻醉下,向一侧股动物注入墨汁约5ml,取下股骨头置中性甲醛液中固定后,经酒精极度脱水处理,用甲基丙烯酸甲酯包埋,聚合,使用低速骨锯制成0.3mm—0.5mm骨片。在光镜下观察毛细血管形态及分布,用测微尺测定单位面积内毛细血管所占比例。

1.4.6    股骨头骨组织内脂肪沉积观察:将上述动物另侧股骨头取下依次按

70%—90% 酒精中固定,行冷冻切片,Lillie氏油红O中性脂肪染色,光镜下观察脂肪分布,并计算有脂肪着色的软骨细胞、骨细胞的比例。

1.4.7股骨头扫描电镜观察:将股骨头坏死模型各组动物取出两只,常规制造扫描电镜标本,在扫描电镜下观察股骨头表面形态及细微结构变化。

1.4.8 血清雌激素水平测定:取去势动物各组血清,用放免法测定雌二醇含量(血清雌二醇放免分析测定,北京北方免疫试剂研究所出品)。

1.4.9 血清25(OH)D3含量测定:取去势大鼠各组血清用竞争蛋白结合法测定25(OH)D3含量。

本文共分 1
 
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